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多克隆抗體制備實(shí)驗(yàn)方法

更新時(shí)間:2022-07-25點(diǎn)擊次數(shù):1409
  多克隆抗體制備主要是哺乳動物和禽類,如兔、綿羊、山羊、鼠、馬等。動物選擇根據(jù)抗體的用途和量來決定,也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如需要大量的抗體,則用大動物;如要獲得直接標(biāo)記診斷的抗體,則用本種動物;如要獲得間接標(biāo)記診斷的抗體,則用異源動物;如抗原量少,且難獲得,則用純系小鼠;一般實(shí)驗(yàn)室用抗體,多用兔或鼠。對于用于診斷的抗體,建議用動物通常選年輕、健康的雄性動物,懷孕的雌性動物一般不用于制備抗體。
 
  多克隆抗體制備實(shí)驗(yàn)方法:
 
  ⒈ 抗原的制備
 
  抗原制備的主要目的在于在免疫動物體內(nèi)產(chǎn)生強(qiáng)、適當(dāng)?shù)目贵w。由于純化的抗原適合產(chǎn)生抗體,因此在注射前通常采用一些經(jīng)典的方法,比如柱層析、分級萃取、亞細(xì)胞分離等進(jìn)行抗原的分離和純化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中為可見的單一帶,抗原從凝膠中的抽提可作為純化的步驟。
 
  ⒉ 預(yù)放血
 
  輕輕的將兔子放在特制兔盒中,處于放松狀態(tài)的兔子采血會較容易。按壓兔子耳根部直至血管突出,然后將針頭插入耳部血管的中上部,觀察到進(jìn)針后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。結(jié)束收集后,退出針頭并按壓傷處以制止血流,再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘以防止激活補(bǔ)體系統(tǒng),再將試管在4°C 放置過夜使血液凝固。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落,將血液轉(zhuǎn)移至塑料離心管中,4°C,10,000g離心10分鐘,收集上清液在4°C保存。
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